同样是一管全血，做ELISA可能要血清，检测凝血或部分循环因子要血浆，做流式、免疫细胞培养又需要PBMC。三种样本的区别不只在离心条件，采血管选错、凝血时间不够、Ficoll分层被打乱，都会直接影响后续结果。

简单区分：血清来自凝固后的全血；血浆来自抗凝全血；PBMC则是从抗凝血中分离出的淋巴细胞和单核细胞。

图1丨血液样本离心分层对比图

血清制备使用不含抗凝剂的采血管，可选择普通血清管或带促凝剂/分离胶的血清管。

采血后将样本静置于室温，使血液充分凝固。常见凝血时间约 15～30 min，无促凝剂采血管可适当延长。凝血完成后，以 1,000～2,000 ×g离心10 min，上层淡黄色液体即为血清。

吸取血清时不要碰到下方血凝块和细胞层。样本不能立即检测时，分装后低温保存，避免反复冻融。

血清常用于ELISA、生化指标、抗体、激素及部分细胞因子检测。由于凝血过程中纤维蛋白原等凝血成分被消耗，血清与血浆不能在同一项目中随意混用。

血浆需要使用抗凝采血管，采血后轻柔颠倒混匀，使血液与抗凝剂充分接触，然后尽快离心。

常见抗凝剂包括：

常规血浆制备可采用 1,000～2,000 ×g离心10 min，离心后上层为血浆，中间薄层为白膜层，下层为红细胞。需要降低血小板残留时，可根据后续实验要求增加进一步离心。

吸取血浆时不要触碰白膜层，否则容易带入白细胞和基因组DNA。做cfDNA、循环RNA等对细胞污染敏感的实验时，通常还需要二次离心进一步去除细胞和碎片。

抗凝剂也要和后续实验匹配。例如EDTA会螯合Ca²⁺、Mg²⁺，肝素可能干扰部分PCR或免疫检测，因此采血前就要确认检测体系要求。

 图2丨三类核心抗凝采血管实拍图

PBMC主要包括淋巴细胞和单核细胞，常用于流式细胞术、免疫分型、细胞培养、单细胞测序及功能实验。

PBMC必须从抗凝血开始处理。以常见Ficoll密度梯度离心为例，先将全血与PBS按约 1:1 稀释，再沿管壁缓慢铺到Ficoll上层，保持血液与分离液之间清晰的界面。

离心条件根据所用密度梯度介质执行。常见Ficoll/Lymphoprep体系约为 400～800 ×g、20～30 min、室温，并关闭刹车。离心后通常可以看到四层结构：

上层血浆 → PBMC白色云雾状环带 → Ficoll层 → 粒细胞和红细胞。

用移液器轻轻吸取PBMC层，转入新的离心管，再加入PBS或含少量血清的缓冲液洗涤。常见洗涤条件为 300～400 ×g、约5 min，洗涤后进行细胞计数和活率检测。

PBMC分离最容易出问题的不是“离心不够久”，而是铺层时把Ficoll和血液混在一起，或者离心结束后使用强刹车破坏分层。

图3丨PBMC 密度梯度离心操作示意图

做血清学、生化、抗体和部分细胞因子检测，通常可以选择血清；需要保留凝血因子、做凝血相关或指定使用抗凝样本的检测时选择血浆；需要研究T细胞、B细胞、NK细胞和单核细胞，则直接分离PBMC。

同一个项目确定使用血清还是血浆后，整批样本尽量保持采血管、处理时间、离心条件和保存方式一致。

血清里有纤维蛋白丝：多见于凝血不充分就开始离心，应等血液充分凝固后再处理。

血浆或血清明显发红：说明发生溶血。采血困难、剧烈震荡、针径不合适或处理不及时都可能增加溶血，部分蛋白、生化和核酸检测会因此受到影响。

PBMC层很散、不明显：先检查铺层时是否混层、离心刹车是否关闭，以及离心力和温度是否符合所用分离液要求。

PBMC里血小板很多：吸取PBMC时带入过多上层血浆，或后续洗涤不足。可在不损失过多细胞的前提下增加针对血小板的低速洗涤步骤。

图4丨正常与溶血样本对比图

血清、血浆和PBMC的处理逻辑可参考：血清先凝血再离心，血浆抗凝后直接离心，PBMC则在抗凝血基础上进行密度梯度分离。