转化生长因子-β(TGF-β)是属于一组新近发现的调节细胞生长和分化的TGF-β超家族。这一家族除TGF-β外,还有活化素(activins)、抑制素(inhibins)、缪勒氏管抑制质(Mullerian inhibitor substance,MIS)和骨形成蛋白(bone morpho-genetic proteins,BMPs)。
TGF-β的命名是根据这种细胞因子能使正常的成纤维细胞的表型发生转化,即在表皮生长因子(EGF)同时存在的条件下,改变成纤维细胞贴壁生长特性而获得在琼脂中生长的能力,并失去生长中密度信赖的抑制作用。起初对TGF-β的生物学功能研究主要在炎症、组织修复和胚胎发育等方面,近年来发现TGF-β对细胞的生长、分化和免疫功能都有重要的调节作用。
1. 实验材料
① 实验细胞:人正常肝成纤维细胞。
② 器械:超净工作台、CO2培养箱、生物倒置显微镜、台式低速离心机。
③ 试剂:0.25% 胰蛋白酶、PBS、成纤维细胞专用培养基。
2. 实验方法
① 配制无菌TGF-β1;
② 细胞铺板24h后,弃上清分别加入含TGF-β1的培养液;
③ 37℃ 5%CO2培养箱继续孵育;
④ 检测相应CCK8和活化相关指标。
3.评价方法
① 光学显微镜观察成纤维细胞形态变化;
② CCK8检测细胞增殖;
③ transwell小室检测成纤维细胞迁移能力;
④ IF/PCR/WB检测成纤维细胞活化的标记蛋白α-SMA、ColⅠ、ColⅢ等的表达水平。
1. 显微镜下可观察TGF-β1诱导人正常肝成纤维细胞活化的形态变化和细胞增殖情况;
2. TGF-β1诱导成纤维细胞增殖实验,需要用检测细胞活率实验进行预实验浓度筛选,筛选出可促进细胞增殖的浓度再进行后续模型评价;
2. 成纤维细胞活化的标记蛋白是细胞活化最有力的评价指标,表达升高表明细胞活化;迁移能力同样是成纤维细胞活化能力评价指标之一,数据有待补充。
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