
癌症作为一种异质性疾病,是一种包括不同细胞类型的复杂生态系统。除肿瘤细胞外,肿瘤还包括与肿瘤相关的基质细胞、微环境中的生长因子和代谢物,它们对肿瘤细胞的生长、侵袭能力和药物反应具有深远的影响。每个患者的肿瘤都呈现出一系列独特的细胞和环境特征,因此肿瘤内部和肿瘤之间具有巨大生物异质性。

类器官培养、免疫细胞共培养及抗血管药物筛选的关键步骤,适用于肿瘤微环境模拟及药物敏感性评估。操作需在无菌环境中进行,建议使用预包被培养皿(如Matrigel)以促进类器官形成。

高通量筛选 (High throughput screening, HTS ) 技术,是指以分子水平和细胞水平的实验检测方法(assay)为基础,以微孔板形式作为载具,以自动化操作系统执行试验过程,以灵敏快速的检测仪器采集实验结果数据,以计算机分析处理实验数据 ,在同一时间检测成千上万的样品,并以得到的相应数据库支持运转的技术体系,它具有微量、快速、灵敏和准确等特点。HTS是发现创新药物的重要技术手段之一,在新药研发和基础研究得到广泛应用。

乳酸脱氢酶(LDH)释放法:在类器官培养的上清液中检测 LDH 的活性,可以间接反映细胞的损伤程度和活力。使用 LDH 检测试剂盒,将类器官细胞培养一段时间后,收集上清液,与试剂盒中的试剂反应,通过比色法或荧光法测定 LDH 的活性。细胞死亡或受损越多,释放到上清液中的 LDH 就越多,从而可以判断细胞活力。

类器官是源于干细胞的三维(3D)多细胞微小组织,旨在贴切模拟人体器官(如肺、肝脏或脑)的复杂结构和功能。类器官通常包含细胞的共培养物并显示出高度的自组装性,因此与传统的二维(2D)细胞培养物相比,可以更好地显示复杂的体内细胞应答以及相互作用。

在类器官细胞培养物中加入相应试剂使类器官裂解,释放ATP,荧光素酶催化底物荧光素的转化,高效利用ATP的能量,发射光子形成光信号。发光强度与ATP在一定范围内成正比,而ATP又与活细胞数目又呈正比,因此可以对类器官活细胞数目进行定量检测。