劳克坚牢蓝(LFB)属于铜-酞箐染料,在酒精溶液中具有与髓鞘磷脂结合的染色特性。应用LFB髓鞘染色可以很好地显示出神经组织的髓鞘结构。
LFB髓鞘染色简介:
劳克坚牢蓝(LFB)属于铜-酞箐染料,在酒精溶液中具有与髓鞘磷脂结合的染色特性。应用LFB髓鞘染色可以很好地显示出神经组织的髓鞘结构。
LFB髓鞘染色实验意义:
LFB染色观察染色阳性纤维的深浅和多少,还可用来定量分析脱髓鞘病变及髓鞘再生等有关髓鞘改变情况。
实验步骤:
(1)石蜡切片脱蜡至水:依次将切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-无水乙醇Ⅰ10min-无水乙醇Ⅱ10min-95%酒精5min-90%酒精5min-80%酒精5min-70%酒精5min-蒸馏水洗。
(2)染色:切片置于0.1% LFB染液60℃孵育过夜,自来水冲洗。
(3)分化:切片放入70%乙醇中(无固定时间);切片浸入0.05% 碳酸锂中,镜下控制分色时间至分色完全(可见灰质部分颜色变淡);如分化不好这两步交替进行几次至镜检满意,水洗。
(4)伊红复染:0.1%伊红复染1min,水洗。
(5)封片:电吹风吹干或烘箱吹干;二甲苯透明数分钟,中性树胶封片。
(6)显微镜镜检,图像采集分析。
实验结果:
经髓鞘呈蓝色;其他成分呈红色。
实验技巧:
(1)切片若为石蜡切片,要在二甲苯中先脱蜡,再至无水乙醇。
(2)0.05%碳酸锂水溶液分色应该在显微镜下进行,至背景呈灰色为止。70%酒精再次分色时,至背景无色为止。
(3) LFB染色完后,可用焦油紫溶液或苏木素-伊红复染,这样能更好地显示出细胞的形态。
(4) 复染之后要入正丁醇漂洗脱水,这样染色效果更佳。
(5) 溶液配制:劳克坚牢蓝1g,95%酒精100ml,10%冰.醋.酸0.5ml。混匀后过滤,室温保存。
LFB髓鞘染色样片参考: