刚果红筛选主要是根据菌落降解纤维素,可以形成降解圈,氯化钠冲洗再烘干后可以让降解圈看的更清楚,更易观察、它可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物,但并不和水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应.在含有纤维素的培养基中加入刚果红染色后,再Nacl用漂洗,Nacl可以使结合不牢的刚果红洗去,这样就留下大大小小的透明圈。
刚果红的原理：
刚果红筛选主要是根据菌落降解纤维素,可以形成降解圈,氯化钠冲洗再烘干后可以让降解圈看的更清楚,更易观察、它可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物,但并不和水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应.在含有纤维素的培养基中加入刚果红染色后,再Nacl用漂洗,Nacl可以使结合不牢的刚果红洗去,这样就留下大大小小的透明圈。
实验步骤：
1、石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-75%酒精5min，自来水洗。
2、刚果红染色：切片入刚果红染液1h，自来水洗2min。
3、背景分化：氢氧花钾溶液分化，至阳性斑块明显，背景基本无色，自来水洗。
4、苏木素染色：切片入苏木素染液染3-5min，自来水洗，分化液分化，自来水洗，返蓝液返蓝，流水冲洗。
5、脱水封片：切片依次放入无水乙醇I 5min -无水乙醇II 5min-无水乙醇Ⅲ5min -二甲苯Ⅰ5min -二甲苯Ⅱ5min透明，中性树胶封片。
6、显微镜镜检，图像采集分析。
结果判读：
淀粉样蛋白呈红色，细胞核呈浅蓝色。
注意事项：
1、区分甲状腺胶质、弹力纤维和胶原纤维，可能都会染成红色；
2、分化时要掌握恰当，分化不足，胶原纤维也呈红色，分化过度，淀粉样变蛋白也可脱色。
