
要实现基因敲除或敲低,首先需要将特定的基因操作工具(如shRNA、CRISPR-Cas系统)高效、稳定地送入靶细胞内部。病毒,作为一种天然的基因递送专家,经过科学家的改造,去除了复制和致病能力,保留了高感染效率的特性,从而成为理想的“运载工具”。

近几年,类器官研究十分火热,在信号通路机制,药筛药敏等研究中对类器官模型需求激增,其中利用crispr-cas9基因编辑技术对类器官进行敲低或敲减来造模是个不错的实验方法,今天给大家带来crispr-cas9基因编辑技术及慢病毒转染方法。

利用慢病毒(Lentivirus)载体实现外源基因递送,对二维条件下培养的大多数哺乳动物细胞有效。相比之下,在类器官的培养条件下,细胞外基质水凝胶对外源病毒感染细胞造成干扰,类器官的干细胞特性,也不利于外源基因的表达。本文介绍了经过优化的慢病毒载体高效基因转导到类器官的实验方法。